無菌接種操作步奏

無菌操作環節

（1）接種室應保持清潔，用煤粉酚皂液擦洗臺面及墻壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前，均應用紫外燈滅菌。定期對接種室作無菌程度的檢查。

（2）進入接種室前，應先做好個人衛生工作，在緩沖間內要更換工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只準在接種室內使用。不準穿到其它地方去，并要定期更換、消毒。

（3）接種的試管、三角并瓶等應做好標記，注明培養基、菌種的名稱、日期。移入接種室內的所有物品，均須在緩沖室用70%酒精擦試干凈。

（4）接種前，雙手用70%酒精或新潔爾消毒，操作過程不離開酒精燈火焰；棉塞不亂放；接種工具使用前后均需火焰滅菌。

（5）培養箱應經常清潔消毒。

接種室的消毒方法

1、紫外線滅菌接種室使用前打開紫外燈照射約30分鐘，就能使空氣和室壁表面基本上無菌。為了加強滅菌效果，在開燈以前可以在接種內噴灑石炭酸溶液，使空氣中附有微生物的塵埃降落，并殺死一些微生物。接種室的臺面等，可以用2-3%的來蘇爾擦洗。紫外線對人體皮膚，尤其對眼睛具有殺傷力，因皮不要直視開著的紫外燈，也不能在開著燈的情況下工作。

2、噴灑石炭酸將石炭酸水浴，稍熱，使之溶解。用吸耳球通過吸管吸取該溶液，配成5%溶液。對于小房間，可用噴霧器由上至下、由里至外順序進行噴霧，并門，稍等片刻即可使用。石炭酸對皮膚有較強的毒害作用，使用時不要接觸皮膚。

3、福爾馬林熏蒸

（1）用量：市售福爾馬林是37-40%的甲醛水溶液。常用量按每立方空間2-6ml計算。

（2）熏蒸方法：用福爾馬林熏蒸有兩種方法：

①加熱熏蒸：按熏蒸空間計算,量取甲醛溶液,放在酒精燈上方的小鐵筒或燒杯中,點燃酒精燈,關閉室門。酒精燈在甲醛蒸完后即自行熄滅。

②氧化熏蒸：在一瓷杯里鋪一張報紙，放入高猛酸鉀（其用量為1/2甲醛量），再取定量的甲醛溶液，倒在盛有高猛酸鉀的容器里，立即關門。幾秒鐘后，由高猛酸鉀氧化甲醛反應所產生的熱將其余的甲醛蒸為氣體。由于甲醛對人眼、鼻有強烈的刺激作用，熏蒸后相當時間內不能進入室內工作。因此，接種室至少在使用前24小時進行熏蒸，房間應密閉，保持12小時。之后可取與甲醛等更是的氨水，倒在一個瓷碗里，放入熏蒸過的接種室，以減少甲醛對人的刺激作用。用氨水中和，至少應在工作前2小時進行。

4、過濾除菌近幾年來，多采用一種稱之為超凈工作臺的接種室，其原理是借助于一鼓風機將普通空氣鼓入，通過粗濾、超濾纖維過濾后，進入工作臺內的空氣即為無菌空氣。整個工作室內要求清潔無塵，這樣可延長超凈工作臺的使用壽命。新的超凈工作臺使用前，要進行無菌試驗，確定合格方可使用，接種前，應先將工作臺開啟5-6分鐘。 接種室無菌程度檢查取無菌的營養瓊脂平板，在接種室內臺上和臺下各放一套，把皿蓋打開15min，然后蓋好，倒置37℃恒溫培養24-28小時，如果每個皿內菌落不超過4個，則可以認為無菌程度良好，若菌落很多，則應對接種室進一步滅菌。